Onclarity HPV Assay (10) Română UTILIZARE SPECIFICĂ BD Onclarity HPV Assay (analiză HPV) este un test de ADN simplificat ce perm

Transcriere

1 Onclarity HPV Assay (10) Română UTILIZARE SPECIFICĂ BD Onclarity HPV Assay (analiză HPV) este un test de ADN simplificat ce permite detectarea calitativă a tipurilor de virus papiloma uman (HPV) de risc înalt. Testul detectează toate tipurile de HPV de risc înalt (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 şi 68) şi permite definirea genotipului a şase tipuri de risc înalt (HPV 16, 18, 31, 45, 51 şi 52). Probele cervicale care sunt testate cu BD Onclarity HPV Assay includ BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (trusă de recoltare cu perie cervicală), BD SurePath Preservative Fluid (lichid de conservare) şi PreservCyt Solution (soluţie) (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau BD SurePath sau ThinPrep). BD Onclarity HPV Assay se efectuează pe sistemul BD Viper LT. REZUMAT ŞI EXPLICAŢII Virusul papiloma uman (HPV) este virusul transmis cel mai des prin contact sexual din lume, 50% din populaţia activă sexual contractând HPV genital în decursul vieţii. Indivizii adesea nu ştiu că sunt infectaţi şi nu iau măsuri de precauţie pentru a împiedica transmiterea virusului la alte persoane. Există peste 40 de tipuri de HPV care pot infecta tractul genital. 1 În multe cazuri, infecţiile cu HPV sunt tranzitorii şi organismul elimină singur virusul. Totuşi, în unele situaţii virusul persistă şi atacă celulele normale care devin maligne, ceea ce duce la cancer. Aceste tipuri oncogene de HPV sunt clasificate ca fiind de risc înalt şi includ HPV 16 şi 18. Alte tipuri sunt considerate cu risc scăzut, deoarece nu par să cauzeze cancer. Conform Organizaţiei Mondiale a Sănătăţii (OMS), HPV este a doua cauză principală a mortalităţii cauzate de cancer la femei în întreaga lume, provocând aproximativ de decese anual. Doar în Europa, această maladie provoacă decesul a aproximativ de persoane în fiecare an. 2 Se estimează că aproape 70% din cancerele de col uterin sunt provocate de tipurile HPV 16 şi În prezent, testele Papanicolau pot informa un medic despre modificările celulelor cervicale. Dacă celulele sunt anormale, se poate realiza un test HPV pentru a se stabili dacă respectivele modificări ale celulelor cervicale sunt cauzate de o tulpină de HPV care poate determina un cancer de col uterin. Nu toate analizele moleculare permit diferenţierea între tipurile de HPV. BD Onclarity HPV Assay, executat pe sistemul BD Viper, este un test de ADN simplificat ce permite detectarea calitativă a tipurilor de virus papiloma uman (HPV) de risc înalt. Testul detectează toate tipurile de HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 şi 68 şi permite identificarea simultană a tipurilor de risc înalt 16, 18, 31, 45, 51, 52 şi a altor genotipuri de risc înalt raportate per grup de genotip (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Probele cervicale care pot fi testate cu BD Onclarity HPV Assay includ BD SurePath Preservative Fluid (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau BD SurePath), soluţia PreservCyt (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau PreservCyt) şi trusa BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. PRINCIPIILE PROCEDURII Testul BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay este conceput pentru utilizare împreună cu BD SurePath Preservative Fluid (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau BD SurePath), soluţia PreservCyt (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau PreservCyt), trusa BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, reactivii aplicabili, sistemul BD Viper LT şi tehnologia de extracţie BD FOX. Probele trec printr-o etapă de preîncălzire cu BD Pre-warm Heater (radiator de preîncălzire), în vederea omogenizării matricei, lizării celulelor şi eliberării ADN-ului care poate fi extras şi amplificat. După răcire, probele sunt încărcate în sistemul BD Viper LT, care efectuează apoi toate etapele necesare pentru extragerea şi amplificarea ADN-ului ţintă, fără nicio intervenţie suplimentară din partea utilizatorului. Proba este transferată într-un flacon de extracţie, care conţine particule de oxid de fier într-o peliculă dizolvabilă. Apoi, este adăugat acid pentru reducerea ph-ului şi pentru a induce o sarcină ă în oxidul de fier, care va lega apoi ADN-ul cu sarcină negativă. Particulele şi ADN-ul legat de acestea sunt apoi atrase către părţile laterale ale flaconului de extracţie cu ajutorul unor magneţi, iar proba tratată este aspirată şi eliminată ca deşeu. Particulele sunt spălate, iar un tampon de eluţie cu nivel ridicat de ph este adăugat pentru extragerea ADN-ului purificat. În cele din urmă, un tampon de neutralizare este utilizat pentru a ajuta ph-ul soluţiei extrase la nivelul optim pentru amplificarea ADN-ului. BD Onclarity HPV Assay se bazează pe amplificarea şi detectarea simultană a ADN-ului ţintă cu ajutorul unor amorse de amplificare şi al unor sonde de detectare marcate fluorescent, folosind reacţia în lanţ a polimerazei (RLP) în timp real. Reactivii sunt uscaţi în trei flacoane (G1, G2 şi G3) care pot detecta genotipurile HPV 14 şi un control intern derivat din probă constând într-un fragment de ADN din gena umană a beta-globinei. Fiecare tub conţine amorsele de amplificare, sondele de detectare marcate fluorescent, polimeraza ADN, nucleotidele şi alţi reactivi necesari pentru amplificare pentru testele respective. Sistemul BD Viper LT System transferă o parte din soluţia de ADN purificată din fiecare flacon de extracţie în cele trei flacoane BD Onclarity HPV PCR (G1, G2 şi G3), care sunt apoi etanşate pentru a preveni contaminarea. Prezenţa sau absenţa ADN-ului de HPV este determinată de ciclul PCR la nivelul căruia semnalul depăşeşte un prag prestabilit. În plus, testul extrage, amplifică şi detectează un fragment din gena umană a beta-globinei drept control intern, pentru a evalua prelucrarea, extracţia şi amplificarea probei. 1

2 REACTIVI ŞI MATERIALE FURNIZATE: Fiecare BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (pachet de reactivi) conţine: Flacoane BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96: fiecare flacon G1 PCR conţine aproximativ 32,5 pmol oligonucleotide, 20 pmol sonde de detectare marcate fluorescent, 80 nmol dntp şi 0,52 unităţi de polimerază ADN cu stabilizatori şi componente tampon. Flacoane BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96: fiecare flacon G2 PCR conţine aproximativ 42,5 pmol oligonucleotide, 30 pmol sonde de detectare marcate fluorescent, 80 nmol dntp şi 0,52 unităţi de polimerază ADN cu stabilizatori şi componente tampon. Flacoane BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96: fiecare flacon G2 PCR conţine aproximativ 42,5 pmol oligonucleotide, 25 pmol sonde de detectare marcate fluorescent, 80 nmol dntp şi 0,52 unităţi de polimerază ADN cu stabilizatori şi componente tampon. NOTĂ: Fiecare pungă conţine un pliculeţ de agent deshidratant. Set de controale pentru BD Onclarity HPV Assay: 24 BD Onclarity HPV Positive Control Tubes (flacoane control ) conţinând aproximativ copii de plasmidă linearizată HPV 16, copii de plasmidă linearizată HPV 18, copii de plasmidă linearizată HPV 56 şi copii de plasmidă conţinând o secvenţă din gena umană în acid nucleic de transport, precum şi 24 BD Onclarity HPV Negative Controls Tubes (flacoane control negativ) conţinând doar acid nucleic de transport. Concentraţiile de acid nucleic de transport şi plasmide sunt determinate prin spectrofotometrie. BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes (flacoane de diluant pentru probe citologice în mediu lichid (LBC) pentru HPV): 400 flacoane a câte aproximativ 1,7 ml tampon cu sare, detergent şi conservant. BD FOX PCR Extraction Tubes (flacoane de extracţie): 48 de benzi a câte 8 fiole, fiecare conţinând aproximativ 10 mg de oxid de fier într-o peliculă dizolvabilă. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (recipient pentru reactivi de extracţie PCR cu instrument de perforare): fiecare recipient pentru reactiv de extracţie cu 5 cavităţi conţine aproximativ 16,5 ml acid de legare, 72,5 ml tampon de spălare, 25,4 ml tampon de eluţie, 19,4 ml tampon de neutralizare cu conservant şi 15,5 ml soluţie de neutralizare a deşeurilor. INSTRUMENT, ECHIPAMENT ŞI CONSUMABILE Materiale furnizate: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (trusă de recoltare cu perie cervicală), instrument BD Viper LT, BD Viper LT Instrument Plates (plăci pentru instrument), BD Viper LT Pipette Tips (vârfuri de pipetă), BD Viper LT Solid Waste Liners (pungi pentru deşeuri solide), BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit (trusă flacoane/tavă PCR pentru sistemul BD Viper LT), BD Viper LT System PCR Accessory Kit (trusă accesorii PCR pentru sistemul BD Viper LT), BD Viper Pre-warm Heater (radiator de pre-încălzire), BD Viper LT Specimen Rack (stativ pentru probe), BD Viper Neutralization Pouches (pungi de neutralizare), flacoane şi capace pentru probe pentru utilizare pe sistemul BD Viper (în modul Extracted (Extracţie)), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit (trusă de colectare şi transport uscat ale probelor endocervicale pentru testul BD ProbeTec de detectare a ADN-ului amplificat de Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC)). Materiale necesare, dar nefurnizate, pentru utilizare împreună cu BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (trusă de recoltare cu perie cervicală) sau pentru transferul manual al alicotelor de probe citologice în mediu lichid: mănuşi de nitril, pipete de deplasare, vârfuri din polipropilenă rezistente la aerosoli, cu capacitate de 0,5 ± 0,05 ml, agitator vortex, soluţie de hipoclorit de sodiu cu concentraţie de 0,5% (v/v), soluţie de hipoclorit de sodiu cu concentraţie de 1% (v/v), peroxid de hidrogen cu concentraţie de 3% (g/v), alcool izopropilic, apă fără nucleaze adecvată pentru biologia moleculară. Materiale necesare, dar nefurnizate, pentru transferul automat al alicotelor de probe citologice în mediu lichid folosind BD Totalys MultiProcessor System (sistem multi-procesor): BD Totalys MultiProcessor (sistem multi-procesor), BD Syringing Pipettes (pipete de distribuire), agitator vortex, mănuşi. Cerinţe privind depozitarea şi manipularea: Diluanţii BD Onclarity HPV LBC Diluent şi BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (diluant perie cervicală HPV) trebuie să fie depozitaţi la 2 25 C. Toţi ceilalţi reactivi pot fi depozitaţi la 2 33 C. Pachetele de reactivi nedeschise sunt stabile până la data expirării. După deschiderea ambalajului, flacoanele PCR sunt stabile timp de 4 săptămâni dacă sunt sigilate în mod adecvat sau până la data expirării, oricare dintre acestea are loc prima. Nu congelaţi. AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢII 1. În scopul diagnosticului in vitro. 2. În probele clinice pot fi prezente microorganisme patogene, inclusiv virusurile hepatice şi virusul imunodeficienţei umane. La manevrarea tuturor elementelor contaminate cu sânge şi alte lichide biologice trebuie respectate Precauţiile standard 4-7 şi regulamentul instituţiei. Pentru mai multe avertismente, atenţionări şi note specifice BD Viper LT, consultaţi Manualul de utilizare al sistemului BD Viper LT. Probe: 3. Pentru probele citologice în mediu lichid, folosiţi doar BD Onclarity HPV LBC Diluent Tubes. 4. Pentru probe recoltate cu peria cervicală, folosiţi doar BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. 5. Funcţionarea optimă a BD Onclarity HPV Assay este condiţionată de recoltarea, manipularea şi transportarea corespunzătoare ale probelor. 6. Pentru a reduce hemoragiile inutile, nu rotiţi peria cervicală mai mult decât este necesar în timpul colectării probelor. 7. Fiecare probă transportată la laborator trebuie să fie corect etichetată. 8. La ruperea tijei periei cervicale, încercaţi să evitaţi vărsarea conţinutului sau generarea aerosolilor. Evitaţi contaminarea capului periei cervicale. 9. Aveţi grijă să evitaţi contaminarea încrucişată în timpul etapelor de manipulare a probelor. Asiguraţi-vă că recipientele de probe nu intră în contact unele cu celelalte şi eliminaţi materialele folosite fără a transporta recipiente deschise. Dacă mănuşile intră în contact cu proba, schimbaţi mănuşile pentru a evita contaminarea încrucişată. 2

3 10. Distribuirea unei cantităţi insuficiente sau prea mari de probă LBC în BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube poate afecta performanţa testului. De asemenea, umplerea excesivă a flacoanelor poate determina vărsarea lichidului pe platforma BD Viper LT, ceea ce poate cauza contaminarea. 11. Probele cervicale trebuie să fie colectate şi testate înainte de data de expirare a flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube sau a flaconului BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent Tube. 12. Pentru transferul manual al probelor în flacoanele BD Onclarity HPV LBC Diluent Tubes (flacoane de diluant), folosiţi doar vârfuri de pipetă din polipropilenă rezistente la aerosoli. 13. Pentru transferul automat, folosiţi doar BD Totalys MultiProcessor pentru a transfera probele BD SurePath LBC în BD Onclarity HPV LBC Diluent Tubes. Analiză/Reactiv: 14. BD Onclarity HPV Positive and Negative Controls (controale e şi negative) trebuie să fie pre-încălzite în termen de 24 de ore de la hidratare. 15. Folosiţi doar flacoane de probe şi de control cu capace perforabile pe sistemul BD Viper LT. Nu îndepărtaţi capacele perforabile înainte de pornirea instrumentului. Aveţi grijă să înlocuiţi eventualele capace perforate cu capace perforabile noi înainte de pornirea instrumentului. 16. Nu interschimbaţi şi nu amestecaţi reactivii din kituri cu numere de loturi diferite. 17. Nu testaţi BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent Tube dacă acesta a fost primit în laborator fără perie. În caz contrar, puteţi obţine un rezultat fals negativ. 18. Folosiţi doar vârfurile de pipetă BD Viper LT furnizate de BD împreună cu sistemul BD Viper LT. 19. Folosiţi doar BD Viper LT Clear Plate Sealers (benzi de etanşare transparente) pe flacoanele PCR împreună cu sistemul BD Viper LT. 20. Pachetele de reactivi conţinând flacoane PCR nefolosite TREBUIE să fie resigilate cu grijă după deschidere. Înainte de a resigila pachetele de reactiv, asiguraţi-vă că nu lipseşte din pachet agentul deshidratant. 21. Flacoanele PCR TREBUIE să fie sigilate corect cu benzile BD Viper LT Clear Plate Sealers înainte de scoatere plăcii din sistemul BD Viper LT. Etanşarea asigură o reacţie închisă pentru amplificare şi detectare şi este necesară pentru evitarea contaminării instrumentului şi a zonei de lucru cu produse de amplificare. Nu îndepărtaţi în niciun moment materialul de etanşare de pe flacoanele PCR. 22. Pentru a preveni contaminarea mediului de lucru cu produse de amplificare, folosiţi pungile pentru deşeuri furnizate în BD Viper LT System PCR Accessory Kit (trusă accesorii PCR pentru sistemul BD Viper LT) pentru a elimina flacoanele PCR testate. Asiguraţi-vă că pungile sunt închise corespunzător înainte de a le arunca. 23. Deşi nu sunt necesare zone de lucru dedicate, deoarece construcţia BD Viper LT reduce posibilitatea contaminării cu amplicon în mediul de testare, apare necesitatea altor măsuri de siguranţă pentru controlarea contaminării, în special pentru evitarea contaminării probelor în timpul manipulării. 24. SCHIMBAŢI MĂNUŞILE dacă acestea intră în contact cu proba sau par umede, pentru a evita contaminarea altor probe. Schimbaţi mănuşile înainte de a părăsi zona de lucru şi înainte de a intra în zona de lucru. 25. În caz de contaminare, consultaţi instrucţiunile de curăţare din Manualul de utilizare al sistemului BD Viper LT. 26. Contactaţi serviciul tehnic şi serviciul de asistenţă BD în cazul unei situaţii neobişnuite, cum ar fi vărsarea lichidelor în instrumentul BD Viper LT sau o contaminare cu ADN imposibil de eliminat prin curăţare. RECOLTAREA ŞI TRANSPORTAREA PROBELOR Probele cervicale care pot fi testate cu BD Onclarity HPV Assay includ BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau BD SurePath) şi PreservCyt Solution (utilizând o alicotă eliminată înainte sau după procesarea pentru testul Papanicolau ThinPrep). Pentru expedieri în SUA şi internaţionale, probele trebuie să fie etichetate în conformitate cu reglementările statale, federale şi internaţionale aplicabile pentru transportul probelor clinice şi al agenţilor etiologici/substanţelor infecţioase. Condiţiile de durată şi de temperatură ale depozitării trebuie să fie menţinute în timpul transportului. 3

4 COLECTAREA PROBELOR CU PERIA CERVICALĂ 1. Introduceţi BD Onclarity HPV Cervical Brush în endocol până când doar perii poziţionaţi cel mai jos pe tijă sunt expuşi la nivelul orificiului colului uterin. Rotiţi încet ¼ până la ½ de tură într-un sens. Pentru a reduce hemoragiile inutile, nu rotiţi peria cervicală mai mult decât este necesar. 2. Scoateţi capacul flaconului BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent Tube şi introduceţi imediat peria până la fundul flaconului. 3. Rupeţi cu grijă tija în dreptul marcajului. Evitaţi vărsarea conţinutului. 4. Strângeţi bine capacul flaconului. TRANSPORTUL ŞI DEPOZITAREA PROBELOR COLECTATE CU PERIA CERVICALĂ Probele colectate cu peria cervicală din flacoanele BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent Tube trebuie să fie depozitate şi transportate la laborator şi/sau centrul de testare în termen de 30 de zile de la colectare, dacă sunt păstrate la temperaturi de 2 30 C, în termen de 180 de zile de la colectare, dacă sunt păstrate la temperaturi de 2 8 C sau în termen de 180 de zile de la colectare, dacă sunt păstrate congelate la -20 C. Transportul şi depozitarea probelor nu trebuie să depăşească data expirării de pe flaconul de diluant pentru peria cervicală. COLECTAREA PROBELOR CITOLOGICE ÎN MEDIU LICHID (LBC) Probele BD SurePath sau PreservCyt trebuie să fie colectate folosind o mătură endocervicală sau o combinaţie perie/spatulă, conform descrierii din prospectul produsului BD SurePath sau PreservCyt. După colectare, probele BD SurePath sau PreservCyt pot fi depozitate şi transportate în fiolele originale timp de maximum 30 de zile la 2 30 C, 180 de zile la 2 8 C sau 180 de zile dacă sunt păstrate congelate la -20 C înainte de a fi transferate în BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent Tubes. TRANSPORTUL ŞI DEPOZITAREA PROBELOR CITOLOGICE ÎN MEDIU LICHID (LBC) Transferul probelor LBC în BD Onclarity HPV LBC Diluent Tubes - înainte sau după prelevarea unei alicote pentru prelucrare pentru testul BD SurePath sau ThinPrep. O alicotă de 0,5 ml de probă BD SurePath sau PreservCyt se transferă din fiola originală în BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent Tube înainte de prelucrare pentru testul BD SurePath sau ThinPrep Pap. Purtaţi mănuşi în timpul manipulării BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent Tube şi a fiolei de probă BD SurePath sau PreservCyt. Dacă mănuşile intră în contact cu proba, schimbaţi-le imediat pentru a evita contaminarea altor probe. Transferul manual al probelor BD SurePath înainte sau după prelucrarea pentru testul BD SurePath NOTĂ: Consultaţi prospectul produsului BD PrepStain Slide Processor (procesor de lamele) sau BD Totalys SlidePrep pentru instrucţiuni privind prelevarea unei alicote din fiola de probă BD SurePath înaintea efectuării testului Papanicolau în mediu lichid BD SurePath. NOTĂ: Manipulaţi câte o singură probă pentru prelucrare. 1. Etichetaţi un flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube cu informaţiile de identificare a pacientului. 2. Scoateţi capacul flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 3. Pentru a obţine un ameste omogen, agitaţi fiola cu probă BD SurePath prin rotire timp de s. 4. Transferaţi rapid 0,5 ml din fiola cu probă folosind un vârf rezistent la aerosoli în flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube, la maximum 1 minut de la amestecarea prin rotire. 5. Eliminaţi vârful de pipetă. NOTĂ: Un vârf de pipetă diferit trebuie să fie folosit pentru fiecare probă. 6. Strângeţi bine capacul flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 7. Răsturnaţi flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube de 3 4 ori pentru a asigura amestecarea corectă a probei şi diluantului. Transferul automat al probei BD SurePath cu ajutorul procesorului BD Totalys MultiProcessor, înainte sau după prelucrarea pentru testul BD SurePath 1. Consultaţi Manualul de utilizare BD Totalys MultiProcessor pentru instrucţiuni privind prelevarea unei alicote din BD SurePath Collection Vial (fiolă de colectare). 2. Consultaţi prospectul flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube pentru instrucţiuni despre încărcarea flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube în MultiProcessor pentru transferul automat al alicotei. Transferul manual al probelor PreservCyt înainte sau după prelucrarea pentru testul Papanicolau ThinPrep NOTĂ: Consultaţi anexa la Manualul de utilizare a sistemului ThinPrep 2.000/3.000 pentru instrucţiuni despre prelevarea unei alicote din fiola cu probă PreservCyt înainte de efectuarea testului ThinPrep. NOTĂ: Manipulaţi câte o singură probă pentru prelucrare. 1. Etichetaţi un flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube cu informaţiile de identificare a pacientului. 2. Scoateţi capacul flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 3. Pentru a obţine un ameste omogen, agitaţi fiola cu probă PreservCyt prin rotire la viteză mare timp de 8 12 s. 4. Transferaţi imediat 0,5 ml din fiola cu probă folosind un vârf rezistent la aerosoli în flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 5. Eliminaţi vârful de pipetă. NOTĂ: Un vârf de pipetă diferit trebuie să fie folosit pentru fiecare probă. 6. Strângeţi bine capacul flaconului BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 7. Răsturnaţi flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube de 3 4 ori pentru a asigura amestecarea corectă a probei şi diluantului. 4

5 Depozitarea şi transportul probelor transferate în BD HPV LBC Diluent Tubes După realizarea transferului într-un flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube, proba diluată poate fi depozitată la 2 30 C timp de maximum 15 zile sau până la 90 de zile dacă este depozitată la -20 C. PROCEDURĂ DE PRELUCRARE PENTRU TOATE PROBELE NOTĂ: Dacă probele au fost congelate, asiguraţi-vă că sunt complet dezgheţate la temperatura camerei şi amestecate prin inversare înainte de a începe. 1. Folosind Tube Layout Report (Raportul de dispunere a flacoanelor), aşezaţi probele în ordine în stativul pentru probe al sistemului BD Viper LT şi blocaţi-le. 2. Probele sunt gata pentru a fi pre-încălzite. 3. Pentru a preveni contaminarea, schimbaţi mănuşile înainte de a continua. PREGĂTIREA CONTROLULUI DE CALITATE 1. Desfaceţi capacul unui flacon de control negativ BD Onclarity HPV Negative Control şi al unui flacon de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 2. Turnaţi întregul conţinut al flaconului de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube în flaconul de control negativ BD Onclarity HPV Negative Control. 3. Puneţi la loc capacul flaconului de control negativ BD Onclarity HPV Negative Control rehidratat. Puneţi la loc capacul flaconului de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube şi eliminaţi flaconul gol. 4. Desfaceţi capacul unui flacon de control BD Onclarity HPV Positive Control şi al unui flacon de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 5. Turnaţi întregul conţinut al flaconului de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube în flaconul de control BD Onclarity HPV Positive Control. 6. Puneţi la loc capacul flaconului de control BD Onclarity HPV Positive Control rehidratat. Puneţi la loc capacul flaconului de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube şi eliminaţi flaconul gol. 7. Folosind Tube Layout Report (Raportul de dispunere a flacoanelor), aşezaţi flaconul de control negativ BD Onclarity HPV Negative Control rehidratat în poziţia corectă în stativul pentru probe BD Viper LT. 8. Folosind Tube Layout Report (Raportul de dispunere a flacoanelor), aşezaţi flaconul de control BD Onclarity HPV Positive Control rehidratat în poziţia corectă în stativul pentru probe BD Viper LT. 9. Flacoanele de control sunt gata pentru a fi pre-încălzite împreună cu probele. NOTĂ: Flacoanele de control trebuie să fie pre-încălzite în termen de 24 de ore de la hidratare. PROCEDURA DE PRE-ÎNCĂLZIRE NOTĂ: Procedura de pre-încălzire trebuie să fie aplicată tuturor probelor pentru a asigura o matrice de probe omogenă înainte de încărcarea pe sistemul BD Viper LT. Omiterea etapei de pre-încălzire a probelor poate avea un efect negativ asupra performanţei BD Onclarity HPV Assay şi/sau a sistemului BD Viper LT. NOTĂ: Probele refrigerate sau congelate trebuie să fie dezgheţate complet la temperatura camerei înainte de pre-încălzire. 1. Introduceţi stativul pentru probe BD Viper LT în radiatorul de pre-încălzire BD şi selectaţi protocolul de pre-încălzire al testului BD Onclarity HPV Assay pe instrumentul BD Viper LT. 2. Radiatorul de pre-încălzire BD va pre-încălzi automat probele şi controalele conform protocolului de pre-încălzire al testului BD Onclarity HPV Assay. 3. După terminarea protocolului testului BD Onclarity HPV Assay, scoateţi stativul din radiator şi încărcaţi-l în instrumentul BD Viper LT. 4. Consultaţi Procedura de testare pentru testarea probelor şi controalelor. 5. După pre-încălzire, probele pot fi stocate până la 7 zile la 2 30 C sau până la 180 la -20 C fără pre-încălzire suplimentară, înainte de a fi testate pe sistemul BD Viper LT. 6. După pre-încălzire, probele pot fi stocate până la 24 h la 2 30 C fără pre-încălzire suplimentară, înainte de a fi testate pe sistemul BD Viper LT. PROCEDURA DE TESTARE Consultaţi Manualul de utilizare al sistemului BD Viper LT System pentru instrucţiuni despre utilizarea şi întreţinerea componentelor sistemului. S-a demonstrat că condiţiile de mediu optime pentru analiza HPV sunt o temperatură între 18 şi 27 C şi 20 85% umiditate relativă. 5

6 CONTROL DE CALITATE Controlul de calitate trebuie să fie efectuat conform reglementărilor locale, naţionale şi/sau federale în vigoare sau cerinţelor de acreditare şi procedurilor de laborator standard pentru controlul de calitate. Se recomandă ca utilizatorul să apeleze la ghidurile adecvate CLSI şi reglementările CLIA pentru tehnici adecvate ale controlului calităţii. Setul de controale pentru BD Onclarity HPV Assay se furnizează separat. Un control şi un control negativ trebuie să fie incluse în fiecare analiză executată şi pentru fiecare număr de lot nou de kit de reactivi. Controalele trebuie să fie amplasate în conformitate cu Manualul de utilizare a sistemului BD Viper LT. Controlul HPV va monitoriza doar erori semnificative ale reactivilor. Controlul negativ HPV monitorizează contaminarea reactivilor şi/sau a mediului. Pot fi testate controale suplimentare, în conformitate cu instrucţiunile sau cerinţele reglementărilor locale, naţionale şi federale sau ale organizaţiilor de acreditare. Informaţii generale despre CC pentru sistemul BD Viper LT: Amplasarea flacoanelor PCR este afişată pe monitorul LCD, într-un ecran care reflectă dispunerea plăcilor prin coduri de culori. Simbolul plus (+) din flacon indică proba CC ă. Simbolul minus (-) din interiorul flaconului indică proba CC negativă. O pereche de CC trebuie înregistrată pentru fiecare număr de lot de kit de reactivi. Dacă perechile CC nu au fost înregistrate corect, se afişează o casetă cu un mesaj care împiedică salvarea stativului şi continuarea seriei de teste până la finalizare. Se pot înregistra flacoane suplimentare (opţionale) pentru testare pentru controlul calităţii. Aceste flacoane sunt testate în acelaşi mod ca probele obişnuite şi nu afectează starea de succes/eşec a analizei. Consultaţi instrucţiunile din Manualul de utilizare al sistemului BD Viper LT. NOTĂ: Controalele BD Onclarity HPV trebuie să fie hidratate manual înainte de încărcarea în BD Viper LT Specimen Rack (stativ pentru probe). Interpretarea rezultatelor controlului de calitate: Controlul BD Onclarity HPV şi controlul negativ BD Onclarity HPV trebuie să genereze un rezultat şi, respectiv, un rezultat negativ pentru obţinerea rezultatelor pacientului. Dacă controalele nu generează rezultatele estimate, seria de teste se consideră nevalidă şi rezultatele pacientului nu vor fi raportate de instrument. Dacă unul dintre controale nu produce rezultatul estimat, repetaţi întreaga serie cu un set nou de controale, flacoane noi de extracţie, un recipent nou de reactiv de extracţie şi flacoane PCR noi. Dacă nu reuşiţi să soluţionaţi problema, contactaţi serviciul tehnic şi serviciul de asistenţă BD pentru informaţii suplimentare. Tabelul 1: Interpretarea rezultatelor controlului de calitate Tip de control Simbol pentru rezultatul flaconului Rezultat CC BD Onclarity HPV Positive Control OK CC reuşit BD Onclarity HPV Positive Control CC nereuşit BD Onclarity HPV Positive Control CC nereuşit BD Onclarity HPV Positive Control CC nereuşit BD Onclarity HPV Negative Control OK CC reuşit BD Onclarity HPV Negative Control CC nereuşit BD Onclarity HPV Negative Control BD Onclarity HPV Negative Control CC nereuşit CC nereuşit Consultaţi secţiunea Interpretarea rezultatelor testului pentru o descriere a simbolurilor din raportul cu rezultatele flacoanelor. INTERPRETAREA REZULTATELOR TESTULUI Testul BD Onclarity HPV Assay foloseşte reacţia în lanţ a polimerazei în timp real pentru a detecta prezenţa virusului papiloma uman (HPV) în probele clinice. Toate calculele sunt efectuate automat de software-ul BD Viper LT. Prezenţa sau absenţa ADN-ului de HPV relevant clinic este determinată de ciclul PCR (Ct) la nivelul căruia semnalul depăşeşte un prag prestabilit. Testul extrage, amplifică şi detectează un fragment din gena umană a beta-globinei drept control intern, pentru a evalua prelucrarea, extracţia şi amplificarea probei şi pentru a indica prezenţa inhibitorilor PCR. Dacă semnalul specific HPV depăşeşte un prag de ciclu, controlul intern este folosit de algoritm în interpretarea rezultatului. Dacă semnalul specific HPV este mai mic sau egal cu un prag de ciclu, controlul intern este ignorat de algoritm. Pentru probele HPV, rezultatul HR (combinaţia tuturor genotipurilor) apare în Tube Results Report (Raportul cu rezultatele flacoanelor). Un simbol în această coloană indică faptul că unul sau mai multe genotipuri pe care le poate detecta analiza HPV au un rezultat. În coloane apar genotipurile particulare şi cele combinate. Dacă rezultatele unui genotip au fost achiziţionate, rezultatele respective sunt raportate conform descrierii furnizate mai jos. Dacă există rezultate pentru genotipuri care nu au fost configurate pentru achiziţia automată, rezultatele respective sunt mascate de o pictogramă-cheie. Instrumentul poate fi configurat pentru a achiziţiona/raporta genotipuri particulare la încheierea execuţiei. Consultaţi Manualul de utilizare BD Viper LT pentru instrucţiuni privind autorizarea raportării automate a genotipurilor. Dacă nu se obţin rezultatele de control estimate, rezultatele pacientului nu sunt raportate. Consultaţi secţiunea Control de calitate pentru a afla care sunt valorile de control estimate. Rezultatele raportate sunt determinate după cum urmează. 6

7 Tabelul 2: Interpretarea rezultatelor testelor pentru genotipurile HPV de risc înalt generate de BD Onclarity HPV Assay Rezultat HPV de risc înalt Interpretare Rezultat HR Pozitiv pentru tipuri HPV de risc înalt HPV de risc înalt HR Negativ pentru tipuri HPV de risc înalt HPV de risc înalt negativ ADN-ul de HPV, dacă este prezent, nu este detectabil. ADN-ul de HPV, dacă este prezent, nu este detectabil. ADN-ul de HPV, dacă este prezent, nu este detectabil. ADN-ul de HPV, dacă este prezent, nu este detectabil. Eşec de control intern Eşec al transferului pentru extracţie Eşec de nivel al lichidului Eroare Tabelul 3: Interpretarea rezultatelor testelor pentru genotipurile HPV de risc înalt particulare generate de BD Onclarity HPV Assay Rezultat genotip HPV Interpretare Rezultat 16 Pozitiv pentru HPV tip 16 HPV tip Negativ pentru HPV tip 16 HPV tip 16 negativ 18 Pozitiv pentru HPV tip 18 HPV tip Negativ pentru HPV tip 18 HPV tip 18 negativ 45 Pozitiv pentru HPV tip 45 HPV tip Negativ pentru HPV tip 45 HPV tip 45 negativ P1 Pozitiv pentru HPV tip 33 şi/sau 58 HPV tip 33 şi/sau 58 P1 Negativ pentru HPV tip 33 şi/sau 58 HPV tip 33 şi/sau 58 negativ 31 Pozitiv pentru HPV tip 31 HPV tip Negativ pentru HPV tip 31 HPV tip 31 negativ P2 Pozitiv pentru HPV tipurile 56, 59 şi/sau 66 HPV tipurile 56, 59 şi/sau 66 P2 Negativ pentru HPV tipurile 56, 59 şi/sau 66 HPV tipurile 56, 59 şi/sau 66 negativ 51 Pozitiv pentru HPV tip 51 HPV tip Negativ pentru HPV tip 51 HPV tip 51 negativ 52 Pozitiv pentru HPV tip 52 HPV tip Negativ pentru HPV tip 52 HPV tip 52 negativ P3 Pozitiv pentru HPV tipurile 35, 39 şi/sau 68 HPV tipurile 35, 39 şi/sau 68 P3 Negativ pentru HPV tipurile 35, 39 şi/sau 68 HPV tipurile 35, 39 şi/sau 68 negativ Rezultatul genotipului HPV este disponibil pentru achiziţionare Rezultatul genotipului este blocat - - Rezultatul genotipului HPV nu este disponibil pentru achiziţionare Rezultat HPV negativ, eşec de control intern, eşec de nivel al lichidului sau eşec al transferului pentru extracţie Depistarea prezenţei contaminării cu ADN Următoarea procedură de testare, care monitorizează zona de lucru şi suprafeţele echipamentului pentru a detecta eventuala contaminare cu ADN a acestora, trebuie efectuată cel puţin lunar. Monitorizarea mediului este esenţială pentru detectarea contaminării înainte de apariţia problemelor. 1. Pentru fiecare zonă care trebuie testată, utilizaţi un tampon de colectare curat din trusa BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit (trusă de colectare şi transport uscat ale probelor endocervicale pentru testul BD ProbeTec de detectare a ADN-ului amplificat de Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC)). 2. Turnaţi apă fără nucleaze, adecvată pentru biologia moleculară, într-un container curat de mici dimensiuni. 3. Umeziţi tamponul în apa fără nucleaze adecvată pentru biologia moleculară şi ştergeţi prima zonă printr-o mişcare largă de baleiere. 4. Scoateţi capacul unui flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube şi introduceţi tamponul în diluant. Amestecaţi rotind tamponul în BD Onclarity HPV Diluent timp de 5 10 s. 5. Apăsaţi tamponul de peretele intern al flaconului, astfel încât lichidul să revină la fundul flaconului. 6. Scoateţi cu atenţie tamponul din flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube pentru a evita stropirea. Aruncaţi tamponul. 7. Strângeţi bine capacul perforabil de culoare neagră pe flaconul BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. 8. Repetaţi procedura pentru toate zonele dorite. 9. După colectarea şi îmbibarea cu diluant a tuturor tampoanelor, prelucraţi-le conform procedurii de pre-încălzire, apoi urmaţi procedura de testare. 7

8 Consultaţi Manualul de utilizare al sistemului BD Viper LT pentru mai multe informaţii despre monitorizarea mediului şi procedurile de curăţare. Dacă nu reuşiţi să soluţionaţi un eveniment de contaminare, contactaţi serviciul tehnic şi serviciul de asistenţă BD pentru informaţii suplimentare. LIMITĂRILE PROCEDURII 1. Funcţionarea optimă a testului este condiţionată de recoltarea şi manipularea corespunzătoare ale probelor. Consultaţi secţiunile Colectarea probelor şi Transportul probelor din acest prospect. 2. Un rezultat negativ nu elimină posibilitatea infecţiei, deoarece rezultatele testelor pot fi afectate de colectarea incorectă a probelor, erori tehnice, substituirea probelor sau o concentraţie de microorganisme din probă sub limita de sensibilitate a testului. 3. Testul BD Onclarity HPV Assay furnizează rezultate calitative. 4. Utilizarea testului BD Onclarity HPV Assay este rezervată personalului instruit pentru efectuarea testului şi pentru utilizarea sistemului BD Viper LT. CARACTERISTICI DE PERFORMANŢĂ Probele BD Onclarity HPV Cervical Brush, probele BD SurePath şi/sau probele PreservCyt au fost colectate de la 836 de femei corespunzând criteriilor protocolului, care au fost urmărite în urma unui test Pap anormal sau infecţiei cu HPV sau femei participând la consultaţii de rutină, în două centre clinice dispersate din punct de vedere geografic în Europa. De la fiecare subiect înscris în studiu s-au colectat câte două probe, în ordinea următoare: o probă BD SurePath (Centrul A) sau o probă PreservCyt (Centrul B) şi o probă BD Onclarity HPV Cervical Brush (transportată într-un flacon BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent Tube). Pentru fiecare flacon de probă citologică recoltată, s-a prelevat o alicotă de 0,5 ml într-un flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. Rezultatele citologice pentru ADN-ul HPV (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) şi rezultatele testului Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA) au fost disponibile pentru majoritatea probelor. Rezultatele de histologie au fost disponibile pentru majoritatea participanţilor la studiu din clincile cu risc înalt. Fiecare centru a înscris, de asemenea, probe reziduale (BD SurePath sau PreservCyt) cu rezultate de citologie asociate, rezultate ale ADN-ului HPV (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), rezultate ale testului Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test şi, acolo unde a fost posibil, rezultate de histologie. Pentru fiecare probă înscrisă, s-a prelevat o alicotă de 0,5 ml într-un flacon BD Onclarity HPV LBC Diluent Tube. Au fost înscrise 510 probe retrospective conforme, rezultatele de histologie fiind disponibile pentru 234 de femei. Toate probele au fost testate pe sistemul BD Viper LT, în conformitate cu prospectul testului şi cu manualul de utilizare. Pentru fiecare tip de mediu s-au calculat sensibilitatea clinică şi specificitatea pentru detectarea maladiei, care se defineşte drept (1) neoplazie cervicală intraepitelială (CIN2) sau rezultat histologic superior sau (2) neoplazie cervicală intraepitelială (CIN3) sau rezultat histologic superior. Analiza finală a datelor include rezultatele testului BD Onclarity HPV Assay realizat pe 472 de probe BD SurePath, 361 de probe PreservCyt şi 515 probe BD Onclarity HPV Cervical Brush: 247 de probe BD Onclarity HPV Cervical Brush (în BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) pentru Centrul A şi 268 de probe BD Onclarity HPV Cervical Brush (în BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) pentru Centrul B. Estimările de performanţă pentru detectarea unei maladii de col uterin de nivel înalt pentru testul BD Onclarity HPV Assay şi testul hc2 sunt prezentate în tabelele 4 şi 5 pentru mediul BD SurePath, tabelele 8 şi 9 pentru mediul PreservCyt şi tabelele 12 şi 13 pentru probele BD Onclarity HPV Cervical Brush. Rezultatele testului BD Onclarity HPV Assay au fost, de asemenea, comparate cu rezultatele ADN-ului HPV ale testului digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test şi cu rezultatele testului Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (referinţă compusă). Un rezultat al ambelor teste hc2 şi RLA (risc ridicat) este definit ca fiind o referinţă compusă ă, un rezultat negativ al ambelor teste hc2 şi RLA (risc ridicat) este definit ca fiind o referinţă compusă negativă, iar atunci când cele două teste generează rezultate diferite (sau rezultatele nu sunt disponibile pentru ambele teste), rezultatul referinţei compuse este definit drept neconcludent. Procentajul de concordanţă ă, negativă şi globală a fost calculat pentru fiecare tip de mediu în raport cu referinţa compusă. Analiza finală a datelor include rezultatele testului BD Onclarity HPV Assay şi rezultatele referinţei compuse (indiferent de histologie) de la 670 de probe BD SurePath şi 674 de probe PreservCyt (Tabelele 6 şi 10). Riscul absolut de maladie (CIN2+ şi CIN3+) în cadrul populaţiei studiate pentru fiecare tip de mediu a fost calculat pentru fiecare genotip sau grup de genotipuri din BD Onclarity HPV Assay. Riscurile absolute sunt calculate atunci când genotipul/grupul de genotipuri este prezent singur şi/sau în prezenţa altor genotipuri. Un tabel enumerând riscurile absolute este prezentat pentru fiecare tip de mediu. Fiecare mediu a fost colectat la un singur centru. De aceea, pot fi estimate diferenţe de itate a HPV şi a genotipurilor din cauza diversităţii populaţiei (Tabelele 7 şi 11). Performanţa clinică a probelor BD SurePath Tabelul 4: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul BD SurePath în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Test Estimare Interval de fiabilitate 95% Estimare Interval de fiabilitate 95% Sensibilitate 97,9% (190/194) (94,8%, 99,2%) 98,4% (190/193) (95,5%, 99,5%) Specificitate 22,7% (63/278) (18,1%, 27,9%) 17,0% (47/277) (13,0%, 21,8%) 8

9 Tabelul 5: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul BD SurePath în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Test Estimare Interval de fiabilitate 95% Estimare Interval de fiabilitate 95% Sensibilitate 97,7% (126/129) (93,4%, 99,2%) 98,4% (126/128) (94,5%, 99,6%) Specificitate 18,7% (64/343) (14,9%, 23,1%) 14,0% (48/342) (10,8%, 18,1%) Tabelul 6: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul BD SurePath în comparaţie cu referinţa compusă BD Onclarity HPV Assay Rezultat referinţă compusă Pozitiv Negativ Neconcludent a Total Pozitiv Negativ Total Procent de echivalenţă (Interval de fiabilitate 95%) 98,5% (97,1%, 99,2%) a Rezultatele hc2 şi RLA sunt diferite sau pentru ambele teste nu sunt disponibile rezultatele. Procent de echivalenţă negativ (Interval de fiabilitate 95%) 89,3% (78,5%, 95,0%) Procent de echivalenţă generală (Interval de fiabilitate 95%) 97,7% (96,1%, 98,6%) Tabelul 7: Risc absolut de CIN2+ şi CIN3+ pentru genotipurile testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul BD SurePath Genotip BD Onclarity HPV Assay HPV16 HPV18 HPV45 HPV33/58 HPV31 HPV56/59/66 HPV51 HPV52 HPV35/39/68 Infecţie cauzată de unul sau mai multe genotipuri Risc absolut CIN2+ 63,9% (99/155) 50,0% (24/48) 46,7% (21/45) 49,4% (42/85) 64,2% (52/81) 25,5% (25/98) 41,7% (15/36) 35,1% (20/57) 36,0% (27/75) Interval de fiabilitate 95% (56,1%, 71,0%) (36,4%, 63,6%) (32,9%, 60,9%) (39,0%, 59,8%) (53,3%, 73,8%) (17,9%, 35,0%) (27,1%, 57,8%) (24,0%, 48,1%) (26,1%, 47,3%) Performanţa clinică a probelor PreservCyt Infecţie cauzată de un singur genotip sau un grup de genotipuri Risc absolut Interval de fiabilitate CIN2+ 95% 64,9% (53,5%, (48/74) 74,8%) 50,0% (26,8%, (7/14) 73,2%) 23,5% (9,6%, (4/17) 47,3%) 47,1% (31,5%, (16/34) 63,3%) 72,7% (51,8%, (16/22) 86,8%) 0,0% (0,0%, (0/29) 11,7%) 25,0% (7,1%, (2/8) 59,1%) 33,3% (13,8%, (4/12) 60,9%) 33,3% (7/21) (17,2%, 54,6%) Infecţie cauzată de unul sau mai multe genotipuri Risc absolut CIN3+ 43,9% (68/155) 43,8% (21/48) 31,1% (14/45) 31,8% (27/85) 40,7% (33/81) 13,3% (13/98) 25,0% (9/36) 19,3% (11/57) 17,3% (13/75) Interval de fiabilitate 95% (36,3%, 51,7%) (30,7%, 57,7%) (19,5%, 45,7%) (22,8%, 42,3%) (30,7%, 51,6%) (7,9%, 21,4%) (13,8%, 41,1%) (11,1%, 31,3%) (10,4%, 27,4%) Infecţie cauzată de un singur genotip sau un grup de genotipuri Risc absolut CIN3+ 47,3% (35/74) 42,9% (6/14) 17,6% (3/17) 23,5% (8/34) 50,0% (11/22) 0,0% (0/29) 12,5% (1/8) 16,7% (2/12) 19,0% (4/21) Tabelul 8: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul PreservCyt în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Test Interval de fiabilitate 95% (36,3%, 58,5%) (21,4%, 67,4%) (6,2%, 41,0%) (12,4%, 40,0%) (30,7%, 69,3%) (0,0%, 11,7%) (2,2%, 47,1%) (4,7%, 44,8%) (7,7%, 40,0%) Estimare Interval de fiabilitate 95% Estimare Interval de fiabilitate 95% Sensibilitate 94,7% (160/169) (90,2%, 97,2%) 97,0% (160/165) (93,1%, 98,7%) Specificitate 50,5% (97/192) (43,5%, 57,5%) 40,8% (75/184) (33,9%, 48,0%) Tabelul 9: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul PreservCyt în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Test Estimare Interval de fiabilitate 95% Estimare Interval de fiabilitate 95% Sensibilitate 94,4% (85/90) (87,6%, 97,6%) 97,7% (85/87) (92,0%, 99,4%) Specificitate 37,3% (101/271) (31,7%, 43,2%) 29,8% (78/262) (24,6%, 35,6%) 9

10 Tabelul 10: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul PreservCyt în comparaţie cu referinţa compusă BD Onclarity HPV Assay Rezultat referinţă compusă Pozitiv Negativ Neconcludent a Total Pozitiv Negativ Total Procent de echivalenţă (Interval de fiabilitate 95%) 96,1% (93,0%, 97,9%) Procent de echivalenţă negativ (Interval de fiabilitate 95%) 98,7% (96,9%, 99,4%) Procent de echivalenţă generală (Interval de fiabilitate 95%) 97,6% (96,1%, 98,5%) a Rezultatele hc2 şi RLA sunt diferite sau pentru ambele teste nu sunt disponibile rezultatele. Tabelul 11: Risc absolut de CIN2+ şi CIN3+ pentru genotipurile testului BD Onclarity HPV Assay cu mediul PreservCyt Genotip BD Onclarity HPV Assay HPV 16 HPV 18 HPV 45 HPV 33/58 HPV 31 HPV 56/59/66 HPV 51 HPV 52 HPV 35/39/68 Infecţie cauzată de unul sau mai multe genotipuri Risc absolut CIN2+ 77,1% (84/109) 50,0% (12/24) 50,0% (6/12) 70,0% (28/40) 67,7% (42/62) 34,0% (18/53) 48,0% (12/25) 73,9% (17/23) 38,5% (10/26) Infecţie cauzată de un singur genotip sau un grup de genotipuri Interval de Risc absolut Interval de fiabilitate 95% CIN2+ fiabilitate 95% (68,3%, 84,0%) (31,4%, 68,6%) (25,4%, 74,6%) (54,6%, 81,9%) (55,4%, 78,0%) (22,7%, 47,4%) (30,0%, 66,5%) (53,5%, 87,5%) (22,4%, 57,5%) 81,4% (57/70) 45,5% (5/11) 25,0% (1/4) 75,0% (15/20) 71,0% (22/31) 11,1% (2/18) 27,3% (3/11) 85,7% (6/7) 40,0% (2/5) (70,8%, 88,8%) (21,3%, 72,0%) (4,6%, 69,9%) (53,1%, 88,8%) (53,4%, 83,9%) (3,1%, 32,8%) (9,7%, 56,6%) (48,7%, 97,4%) (11,8%, 76,9%) Infecţie cauzată de unul sau mai multe genotipuri Risc absolut CIN3+ 44,0% (48/109) 29,2% (7/24) 16,7% (2/12) 35,0% (14/40) 30,6% (19/62) 9,4% (5/53) 16,0% (4/25) 26,1% (6/23) 15,4% (4/26) Interval de fiabilitate 95% (35,1%, 53,4%) (14,9%, 49,2%) (4,7%, 44,8%) (22,1%, 50,5%) (20,6%, 43,0%) (4,1%, 20,3%) (6,4%, 34,7%) (12,5%, 46,5%) (6,1%, 33,5%) Infecţie cauzată de un singur genotip sau un grup de genotipuri Risc absolut CIN3+ 50,0% (35/70) 18,2% (2/11) 0,0% (0/4) 50,0% (10/20) 41,9% (13/31) 0,0% (0/18) 18,2% (2/11) 42,9% (3/7) 20,0% (1/5) Interval de fiabilitate 95% (38,6%, 61,4%) (5,1%, 47,7%) (0,0%, 49,0%) (29,9%, 70,1%) (26,4%, 59,2%) (0,0%, 17,6%) (5,1%, 47,7%) (15,8%, 75,0%) (3,6%, 62,4%) Performanţa clinică a probelor BD Onclarity HPV Cervical Brush Tabelul 12: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu probe BD Onclarity HPV Cervical Brush în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN2+) Centru A B Estimare BD Onclarity HPV Assay 95% Interval de fiabilitate Estimare hc2 HPV DNA Test 95% Interval de fiabilitate Sensibilitate 97,2% (104/107) (92,1%, 99,0%) 99,1% (106/107) (94,9%, 99,8%) Specificitate 17,9% (25/140) (12,4%, 25,0%) 21,4% (30/140) (15,4%, 28,9%) Sensibilitate 100,0% (121/121) (96,9%, 100,0%) 97,5% (116/119) (92,8%, 99,1%) Specificitate 37,4% (55/147) (30,0%, 45,5%) 43,0% (61/142) (35,1%, 51,2%) Tabelul 13: Performanţa testului BD Onclarity HPV Assay cu probe BD Onclarity HPV Cervical Brush în comparaţie cu rezultatele de histologie (CIN3+) Centru A B BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Test Estimare 95% 95% Estimare Interval de fiabilitate Interval de fiabilitate Sensibilitate 97,3% (72/74) (90,7%, 99,3%) 98,6% (73/74) (92,7%, 99,8%) Specificitate 15,0% (26/173) (10,5%, 21,1%) 17,3% (30/173) (12,4%, 23,7%) Sensibilitate 100,0% (60/60) (94,0%, 100,0%) 98,3% (57/58) (90,9%, 99,7%) Specificitate 26,4% (55/208) (20,9%, 32,8%) 31,0% (63/203) (25,1%, 37,7%) 10

11 Studii analitice Sensibilitate analitică la pragul clinic: Limita de detecţie (LOD) la pragul clinic HPV a fost stabilită pentru testul BD Onclarity HPV Assay folosind linii celulare HPV e: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) şi MS751 (HPV 45) şi ADN clonat într-o plasmidă conţinând secvenţele pentru următoarele genotipuri HPV: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 şi 68 în BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution şi BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent conţinând o linie celulară HPV negativă (C33A). Liniile celulare HPV au fost testate individual, iar plasmidele HPV au fost testate colectiv în trei grupuri: 1) HPV 31, 33, 51, 52 şi 59; 2) HPV 56, 58, 68; şi 3) HPV 35 şi 66. Minimum patruzeci şi cinci copii ale fiecăruia dintre cele şase nivele ţintă pentru liniile celulare HPV şi douăzeci de copii ale fiecăruia dintre cele şase nivele ţintă pentru plasmidele HPV au fost testate pe minimul trei loturi de reactivi şi minimum trei sisteme BD Viper LT Systems. LOD este nivelul de ADN HPV prezent în proba nediluată care prezintă rezultate e peste pragul clinic în cel puţin 95% din situaţii. Valoarea LOD maximă pentru fiecare dintre genotipurile HPV şi pentru medii sunt descrise în tabelul 14. Tabelul 14: Sensibilitatea analitică Ţintă Mediu BD SurePath (Interval de fiabilitate 95%) Mediu PreservCyt (Interval de fiabilitate 95%) BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (Interval de fiabilitate 95%) SiHa (HPV 16) celule/ml ( ) ( ) 137 ( ) HeLa (HPV 18) celule/ml 876 ( ) ( ) 51 (46 56) MS751 (HPV 45) celule/ml ( ) ( ) 305 ( ) HPV 31 copii/ml ( ) ( ) 692 ( ) HPV 33 copii/ml ( ) ( ) ( ) HPV 35 copii/ml ( ) ( ) ( ) HPV 39 copii/ml ( ) ( ) ( ) HPV 51 copii/ml ( ) ( ) ( ) HPV 52 copii/ml ( ) ( ) 833 ( ) HPV 56 copii/ml ( ) ( ) 836 ( ) HPV 58 copii/ml ( ) ( ) ( ) HPV 59 copii/ml ( ) ( ) 772 ( ) HPV 66 copii/ml ( ) ( ) 701 ( ) HPV 68 copii/ml ( ) ( ) ( ) Reactivitate încrucişată: Un panou de bacterii, levuri şi virusuri cultivate împreună cu ADN-ul clonat într-o plasmidă conţinând secvenţele ţintă de HPV de risc înalt şi de risc scăzut a fost folosit pentru a evalua specificitatea analitică a testului BD Onclarity HPV Assay pe sistemul BD Viper LT. Fiecare potenţial declanşator de reacţie încrucişată a fost testat individual în BD SurePath Preservative Fluid şi în PreservCyt Solution conţinând o linie celulară HPV negativă (C33A). Microorganismele sunt descrise în tabelele 15 şi 16. Testul BD Onclarity HPV Assay nu a declanşat nicio reacţie încrucişată cu microorganismele testate. 11